新疆农业科学 ›› 2022, Vol. 59 ›› Issue (10): 2365-2373.DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2022.10.004
• 作物遗传育种·耕作栽培·种质资源·分子遗传学 • 上一篇 下一篇
陆小双(), 张梦洁, 韩万里, 龙遗磊, 刘鹏飞, 陈全家, 曲延英, 邓晓娟()
收稿日期:
2021-11-13
出版日期:
2022-10-20
发布日期:
2022-12-21
通信作者:
邓晓娟
作者简介:
陆小双(1996-),女,硕士研究生,研究方向为海岛棉枯萎病抗性,(E-mail)1846599848@qq.com
基金资助:
LU Xiaoshuang(), ZHANG Mengjie, HAN Wanli, LONG Yilei, LIU Pengfei, CHEN Quanjia, QU Yanying, DENG Xiaojuan()
Received:
2021-11-13
Online:
2022-10-20
Published:
2022-12-21
Correspondence author:
DENG Xiaojuan
Supported by:
摘要:
【目的】运用SSR( Simple sequence repeat) 分子标记关联分析204份海岛棉种质资源的抗枯萎病性状,为抗枯萎病棉花育种材料的利用、分子标记辅助选择提供参考。【方法】采用前期实验室研究的抗病基因序列,设计出40对SSR分子标记,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测筛选标记引物特异性,并鉴定204份海岛棉种质资源。【结果】(1)从40对引物中筛选出6对引物具有多态性,多次重复后选用CHS-04和CHS-05两个分子标记,均来自类黄酮代谢途径;(2)引物CHS-04扩增条带与群体抗病性一致率介于41.67%~52.94%,平均值为46.67%;引物CHS-05扩增条带与群体材料一致率介于30.39%~54.68%,平均值为35.78%。【结论】引物CHS-04和CHS-05可以作为海岛棉枯萎病抗性的分子标记鉴定指标。
中图分类号:
陆小双, 张梦洁, 韩万里, 龙遗磊, 刘鹏飞, 陈全家, 曲延英, 邓晓娟. 海岛棉抗枯萎病性状与 SSR标记的关联分析[J]. 新疆农业科学, 2022, 59(10): 2365-2373.
LU Xiaoshuang, ZHANG Mengjie, HAN Wanli, LONG Yilei, LIU Pengfei, CHEN Quanjia, QU Yanying, DENG Xiaojuan. Association Analysis of Fusarium wilt Resistance Traits and SSR Markers in Island Cotton[J]. Xinjiang Agricultural Sciences, 2022, 59(10): 2365-2373.
来源地 Origin region | 数量(份) Number | 来源地 Origin region | 数量(份) Number |
---|---|---|---|
中国新疆 Xinjiang China | 47 | 美国 America | 15 |
中国内地 China's inland | 52 | 埃及 Egypt | 15 |
前苏联 Former Soviet Union | 45 | 阿尔巴尼亚 Albania | 2 |
未知 Unknown | 27 |
表1 204份海岛棉材料来源
Table 1 The origin regions of 204 sea island cotton accessions
来源地 Origin region | 数量(份) Number | 来源地 Origin region | 数量(份) Number |
---|---|---|---|
中国新疆 Xinjiang China | 47 | 美国 America | 15 |
中国内地 China's inland | 52 | 埃及 Egypt | 15 |
前苏联 Former Soviet Union | 45 | 阿尔巴尼亚 Albania | 2 |
未知 Unknown | 27 |
病级 Disease stage | 苗期 Seedling stage |
---|---|
0 | 健株,无病状 |
1 | 子叶变黄发紫,真叶无病症 |
2 | 子叶和少数真叶发黄或发紫出现矮化病症 |
3 | 子叶和大部分真叶呈现典型病症,病叶发黄或 发紫,株型矮缩或萎蔫 |
4 | 植株萎蔫,青枯死亡 |
表2 棉花枯萎病级划分标准
Table 2 The classification standard of cotton Fusarium wilt
病级 Disease stage | 苗期 Seedling stage |
---|---|
0 | 健株,无病状 |
1 | 子叶变黄发紫,真叶无病症 |
2 | 子叶和少数真叶发黄或发紫出现矮化病症 |
3 | 子叶和大部分真叶呈现典型病症,病叶发黄或 发紫,株型矮缩或萎蔫 |
4 | 植株萎蔫,青枯死亡 |
抗病类型 Resistance Type | 病情指数 Disease Index | 反应型 Reaction Type |
---|---|---|
免疫 Immune | 0.0 | I |
高抗 Highly Resistance | 0.1~5.0 | HR |
抗病 Resistance | 5.1~10.0 | R |
耐病 Tolerance | 10.1~20.0 | T |
感病 Susceptible | ≥20.1 | S |
表3 棉花材料抗病性划分标准
Table 3 Criteria for disease resistance of cotton materials
抗病类型 Resistance Type | 病情指数 Disease Index | 反应型 Reaction Type |
---|---|---|
免疫 Immune | 0.0 | I |
高抗 Highly Resistance | 0.1~5.0 | HR |
抗病 Resistance | 5.1~10.0 | R |
耐病 Tolerance | 10.1~20.0 | T |
感病 Susceptible | ≥20.1 | S |
基因名称 Gene name | SSR引物 (对) SSR primers (pair) | 基因来源 Gene Source | 基因功能 Gene function |
---|---|---|---|
ANR | 8 | 类黄酮代谢途径 | 花青素还原酶 |
CHI | 5 | 类黄酮代谢途径 | 查尔酮异构酶 |
CHS | 5 | 类黄酮代谢途径 | 查尔酮合成酶 |
DFR | 10 | 类黄酮代谢途径 | 二氢黄酮醇还原酶 |
FLS | 12 | 类黄酮代谢途径 | 黄酮醇还原酶 |
表4 SSR引物及基因来源
Table 4 SSR primers and gene sources
基因名称 Gene name | SSR引物 (对) SSR primers (pair) | 基因来源 Gene Source | 基因功能 Gene function |
---|---|---|---|
ANR | 8 | 类黄酮代谢途径 | 花青素还原酶 |
CHI | 5 | 类黄酮代谢途径 | 查尔酮异构酶 |
CHS | 5 | 类黄酮代谢途径 | 查尔酮合成酶 |
DFR | 10 | 类黄酮代谢途径 | 二氢黄酮醇还原酶 |
FLS | 12 | 类黄酮代谢途径 | 黄酮醇还原酶 |
抗病类型 Resistance type | 数量 Number (份) | 病情指数Disease index | 所占 比例 Propor tion(%) | ||
---|---|---|---|---|---|
最大值 Maximum value | 最小值 Minimum value | 平均值 Mean value | |||
高抗(HR) Highly Resistance | 2 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 0.98 |
抗病(R) Resistance | 34 | 10.0 | 7.5 | 19.13 | 16.67 |
耐病(T) Tolerance | 107 | 20.0 | 12.5 | 19.05 | 52.45 |
感病(S) Susceptible | 61 | 47.5 | 22.5 | 28.77 | 29.90 |
表5 海岛棉材料的室内鉴定结果
Table 5 Indoor identification results of island cotton materials
抗病类型 Resistance type | 数量 Number (份) | 病情指数Disease index | 所占 比例 Propor tion(%) | ||
---|---|---|---|---|---|
最大值 Maximum value | 最小值 Minimum value | 平均值 Mean value | |||
高抗(HR) Highly Resistance | 2 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 0.98 |
抗病(R) Resistance | 34 | 10.0 | 7.5 | 19.13 | 16.67 |
耐病(T) Tolerance | 107 | 20.0 | 12.5 | 19.05 | 52.45 |
感病(S) Susceptible | 61 | 47.5 | 22.5 | 28.77 | 29.90 |
图1 枯萎病抗性相关引物扩增产物电泳 注:A:CHS-04 PCR 扩增产物M:D2000 Maker;1:新海14号;2:06-146;3:埃棉2号;4:DJ-07-136;5:Pimas-7;6:海92-3;7:埃及棉424 B:CHS-05 PCR 扩增产物M:D2000 Maker;a:新海14号;b:06-146;c:埃棉2号;d:DJ-07-136;e:Pimas-7;f:海92-3;g:埃及棉424
Fig.1 Electrophoresis diagram of amplified products of Fusarium wilt resistance related primers Note:A:CHS-04 PCR amplification product M:D2000 Maker;1:XinHai 14;2:06-146;3:Ai Mian No. 2;4:DJ-07-136;5:Pimas-7;6:Hai 92-3;7:Egyptian cotton No. 424 B:CHS-05 PCR amplification product M:D2000 Maker;a:XinHai 14;b:06-146;c:Ai Mian No. 2;d:DJ-07-136;e:Pimas-7;f:Hai 92-3;g:Egyptian cotton No. 424
引物名称 Primer Name | 新海14号 Xinhai 14 | 海92-3 Hai 92-3 | 埃及棉424 Aijimian 424 | 06-146 | 埃棉2号 Aimian 2 | DJ-07-136 | Pimas-7 | 是否具有差异 Difference |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
ANR-01 | + | + | - | + | + | + | + | 否 |
ANR-02 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
ANR-03 | + | + | - | + | + | + | + | 否 |
ANR-04 | - | + | + | - | + | + | + | 否 |
ANR-05 | - | + | + | + | + | + | + | 否 |
ANR-06 | + | + | - | - | - | - | + | 是 |
ANR-07 | + | + | + | + | + | + | - | 否 |
ANR-08 | - | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-01 | + | - | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-02 | - | - | - | + | + | + | + | 是 |
CHI-03 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-04 | - | - | - | + | - | - | + | 否 |
CHI-05 | - | + | - | + | + | + | + | 是 |
CHS-01 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHS-02 | + | + | + | + | - | + | + | 否 |
CHS-03 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHS-04 | - | - | - | + | - | + | + | 是 |
CHS-05 | + | - | - | + | + | + | + | 是 |
DRF-01 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-02 | + | + | + | + | + | + | - | 否 |
DRF-03 | + | + | + | - | + | + | - | 否 |
DRF-04 | - | - | - | - | + | + | + | 否 |
DRF-05 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-06 | + | + | + | - | + | + | + | 否 |
DRF-07 | + | - | - | + | + | + | - | 否 |
DRF-08 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-09 | - | - | - | - | - | - | - | 否 |
DRF-10 | + | + | - | - | - | - | - | 否 |
FLS-01 | + | - | + | + | + | - | - | 否 |
FLS-02 | - | + | - | + | + | + | + | 否 |
FLS-03 | - | + | - | + | + | - | - | 否 |
FLS-04 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-05 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-06 | + | - | - | - | + | + | - | 否 |
FLS-07 | - | - | + | - | - | - | - | 否 |
FLS-08 | - | + | + | + | - | + | - | 否 |
FLS-09 | - | - | - | - | - | + | + | 否 |
FLS-10 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-11 | - | + | - | - | + | + | + | 是 |
FLS-12 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
表6 引物筛选PCR扩增电泳
Table 6 primer screening PCR amplification electrophoresis results
引物名称 Primer Name | 新海14号 Xinhai 14 | 海92-3 Hai 92-3 | 埃及棉424 Aijimian 424 | 06-146 | 埃棉2号 Aimian 2 | DJ-07-136 | Pimas-7 | 是否具有差异 Difference |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
ANR-01 | + | + | - | + | + | + | + | 否 |
ANR-02 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
ANR-03 | + | + | - | + | + | + | + | 否 |
ANR-04 | - | + | + | - | + | + | + | 否 |
ANR-05 | - | + | + | + | + | + | + | 否 |
ANR-06 | + | + | - | - | - | - | + | 是 |
ANR-07 | + | + | + | + | + | + | - | 否 |
ANR-08 | - | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-01 | + | - | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-02 | - | - | - | + | + | + | + | 是 |
CHI-03 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHI-04 | - | - | - | + | - | - | + | 否 |
CHI-05 | - | + | - | + | + | + | + | 是 |
CHS-01 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHS-02 | + | + | + | + | - | + | + | 否 |
CHS-03 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
CHS-04 | - | - | - | + | - | + | + | 是 |
CHS-05 | + | - | - | + | + | + | + | 是 |
DRF-01 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-02 | + | + | + | + | + | + | - | 否 |
DRF-03 | + | + | + | - | + | + | - | 否 |
DRF-04 | - | - | - | - | + | + | + | 否 |
DRF-05 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-06 | + | + | + | - | + | + | + | 否 |
DRF-07 | + | - | - | + | + | + | - | 否 |
DRF-08 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
DRF-09 | - | - | - | - | - | - | - | 否 |
DRF-10 | + | + | - | - | - | - | - | 否 |
FLS-01 | + | - | + | + | + | - | - | 否 |
FLS-02 | - | + | - | + | + | + | + | 否 |
FLS-03 | - | + | - | + | + | - | - | 否 |
FLS-04 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-05 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-06 | + | - | - | - | + | + | - | 否 |
FLS-07 | - | - | + | - | - | - | - | 否 |
FLS-08 | - | + | + | + | - | + | - | 否 |
FLS-09 | - | - | - | - | - | + | + | 否 |
FLS-10 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
FLS-11 | - | + | - | - | + | + | + | 是 |
FLS-12 | + | + | + | + | + | + | + | 否 |
材料名称 Material Name | 抗病类型 Resistance type | CHS -04 | CHS -05 |
---|---|---|---|
新海14号Xinhai 14 | 感病 | 1 | 2 |
海92-3Hai 92-3 | 感病 | 0 | 2 |
埃及棉424Aijimian 424 | 感病 | 1 | 2 |
06-146 | 抗病 | 1 | 2 |
埃棉2号Aimian 2 | 抗病 | 1 | 2 |
新海14号Xinhai 14 | 抗病 | 1 | 2 |
海92-3Hai 92-3 | 抗病 | 1 | 1 |
表7 抗病材料普遍条带与材料抗性的一致率
Table 7 Consistent rate of common strips and resistance of resistant materials
材料名称 Material Name | 抗病类型 Resistance type | CHS -04 | CHS -05 |
---|---|---|---|
新海14号Xinhai 14 | 感病 | 1 | 2 |
海92-3Hai 92-3 | 感病 | 0 | 2 |
埃及棉424Aijimian 424 | 感病 | 1 | 2 |
06-146 | 抗病 | 1 | 2 |
埃棉2号Aimian 2 | 抗病 | 1 | 2 |
新海14号Xinhai 14 | 抗病 | 1 | 2 |
海92-3Hai 92-3 | 抗病 | 1 | 1 |
图2 引物CHS-04扩增部分群体材料PCR产物电泳 注:M:D2000Maker;1:苏K202;2:新海35号;3:吐77-104;4:跃61;5:孔雀200;6:吉1;7:NMGB-16;8:司-6002;9:巴1248;10:鸡爪海岛棉长;11:跃51;12:90199;13:云南4号;14:海92-2;15:巴3119;16:9078依;17:军海1号;18:墨-1413;19:阿101;20:吉2;21:新海34号;22:新海27号;23:910u;24:7059;25:长绒;26:5917;27:吐82-6-17;28:吉扎31;29:NMGB-2;30:新海36号;31:海岛棉3;32:K366;33:NMGB-10;34:C-6019;35:7051;36:H3549,下同
Fig.2 PCR product electrophoresis of primers CHS-04 amplified parts of the population material Note:M:D2000Maker;1:Su K202; 2:XinHai 35; 3:Tu 77-104; 4:Yue 61; 5:The peacock, 200; 6:Ji 1; 7:NMGB-16; 8:Si-6002; 9:Ba 1248; 10:Chicken foot cotton; 11:Yue 51; 12:90199; 13:YunNan No.4; 14:Hai 92-2; 15:Ba 3119; 16:9078 Yi; 17:Junhai No.1; 18:Mo-1413; 19:A 101; 20:Ji 2; 21:XinHai 34; 22:XinHai 27; 23:910u; 24:7059; 25:Long staple cotton; 26:5917; 27:Tu 82-6-17; 28:Jiza 31; 29:NMGB-2; 30:XinHai 36; 31:Sea island cotton 3; 32:K366; 33:NMGB-10; 34:C-6019; 35:7051; 36:H3549
序号 Serial number | 材料名称 Material Name | 抗病类型 Resis tance type | 引物 CHS-04 primers CHS-04 | 引物 CHS-05 primers CHS-05 |
---|---|---|---|---|
1 | 苏K202 | 耐病(T) | 0 | 0 |
2 | 新海35号 | 抗病(R) | 0 | 2 |
3 | 吐77-104 | 耐病(T) | 1 | 0 |
4 | 跃61 | 感病(S) | 1 | 0 |
5 | 孔雀200 | 抗病(R) | 0 | 1 |
6 | 吉1 | 耐病(T) | 1 | 0 |
7 | NMGB-16 | 感病(S) | 1 | 0 |
8 | 司-6002 | 耐病(T) | 0 | 0 |
9 | 巴1248 | 感病(S) | 0 | 0 |
10 | 鸡爪海岛棉长 | 抗病(R) | 0 | 1 |
11 | 跃51 | 抗病(R) | 0 | 0 |
12 | 90199 | 感病(S) | 1 | 0 |
13 | 云南4号 | 感病(S) | 0 | 0 |
14 | 海92-2 | 感病(S) | 1 | 2 |
15 | 巴3119 | 感病(S) | 0 | 2 |
16 | 9078依 | 耐病(T) | 0 | 0 |
17 | 军海1号 | 耐病(T) | 0 | 2 |
18 | 墨-1413 | 耐病(T) | 0 | 2 |
19 | 阿101 | 耐病(T) | 1 | 0 |
20 | 吉2 | 感病(S) | 1 | 2 |
21 | 新海34号 | 耐病(T) | 0 | 2 |
22 | 新海27号 | 耐病(T) | 1 | 1 |
23 | 910u | 抗病(R) | 1 | 0 |
24 | 7059 | 高抗(HR) | 0 | 2 |
25 | 长绒 | 耐病(T) | 0 | 0 |
26 | 5917 | 抗病(R) | 0 | 2 |
27 | 吐82-6-17 | 抗病(R) | 1 | 2 |
28 | 吉扎31 | 耐病(T) | 0 | 0 |
29 | NMGB-2 | 耐病(T) | 1 | 0 |
30 | 新海36号 | 耐病(T) | 1 | 2 |
31 | 海岛棉3 | 耐病(T) | 0 | 0 |
32 | K366 | 抗病(R) | 0 | 2 |
33 | NMGB-10 | 抗病(R) | 1 | 0 |
34 | C-6019 | 耐病(T) | 1 | 0 |
35 | 7051 | 感病(S) | 0 | 2 |
36 | H3549 | 耐病(T) | 0 | 2 |
表8 引物CHS-04、CHS-05扩增部分群体材料PCR条带一致率
Table 8 PCR band consistency rate of primers CHS-04 and CHS-05 amplified parts of the population materials
序号 Serial number | 材料名称 Material Name | 抗病类型 Resis tance type | 引物 CHS-04 primers CHS-04 | 引物 CHS-05 primers CHS-05 |
---|---|---|---|---|
1 | 苏K202 | 耐病(T) | 0 | 0 |
2 | 新海35号 | 抗病(R) | 0 | 2 |
3 | 吐77-104 | 耐病(T) | 1 | 0 |
4 | 跃61 | 感病(S) | 1 | 0 |
5 | 孔雀200 | 抗病(R) | 0 | 1 |
6 | 吉1 | 耐病(T) | 1 | 0 |
7 | NMGB-16 | 感病(S) | 1 | 0 |
8 | 司-6002 | 耐病(T) | 0 | 0 |
9 | 巴1248 | 感病(S) | 0 | 0 |
10 | 鸡爪海岛棉长 | 抗病(R) | 0 | 1 |
11 | 跃51 | 抗病(R) | 0 | 0 |
12 | 90199 | 感病(S) | 1 | 0 |
13 | 云南4号 | 感病(S) | 0 | 0 |
14 | 海92-2 | 感病(S) | 1 | 2 |
15 | 巴3119 | 感病(S) | 0 | 2 |
16 | 9078依 | 耐病(T) | 0 | 0 |
17 | 军海1号 | 耐病(T) | 0 | 2 |
18 | 墨-1413 | 耐病(T) | 0 | 2 |
19 | 阿101 | 耐病(T) | 1 | 0 |
20 | 吉2 | 感病(S) | 1 | 2 |
21 | 新海34号 | 耐病(T) | 0 | 2 |
22 | 新海27号 | 耐病(T) | 1 | 1 |
23 | 910u | 抗病(R) | 1 | 0 |
24 | 7059 | 高抗(HR) | 0 | 2 |
25 | 长绒 | 耐病(T) | 0 | 0 |
26 | 5917 | 抗病(R) | 0 | 2 |
27 | 吐82-6-17 | 抗病(R) | 1 | 2 |
28 | 吉扎31 | 耐病(T) | 0 | 0 |
29 | NMGB-2 | 耐病(T) | 1 | 0 |
30 | 新海36号 | 耐病(T) | 1 | 2 |
31 | 海岛棉3 | 耐病(T) | 0 | 0 |
32 | K366 | 抗病(R) | 0 | 2 |
33 | NMGB-10 | 抗病(R) | 1 | 0 |
34 | C-6019 | 耐病(T) | 1 | 0 |
35 | 7051 | 感病(S) | 0 | 2 |
36 | H3549 | 耐病(T) | 0 | 2 |
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