海岛棉组培mRNA差异显示体系的建立

The Construction of the DDRT- PCR System on Gossypium barbadense Tissue Culture

    摘要
  • 摘要: 目的建立适合海岛棉组织培养过程中差异基因表达研究的DDRT-PCR体系.方法试验选取海岛棉体胚发育过程中的胚性愈伤组织,无菌苗下胚轴为对照.对引物浓度、dNTP浓度、酶浓度和退火温度等影响差异显示PCR的关键因素进行单因素优化实验.结果确定了海岛棉组织培养差异显示PCR体系为(10 μL):cDNA 2 μL;dNTP 200 μmol/L;上游引物0.4 μL(10 μM),下游引物0.5 μL(10 μM);Taq酶0.5 U,Buffer1.0 μL.前5个循环退火温度为50℃,后30个循环退火温度为57.1℃.结论用该体系扩增,PCR产物特异性高,条带清晰,背景污染少.

     

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