盐穗木HcGKR基因亚细胞定位表达载体的构建及定位分析

Construction of Expression Vector and Subcellular Localization Analysis of Guanylate Kinase -related Protein Gene in Halostachys caspica

摘要: 目的以GFP基因为报告基因,构建HcGKR基因的亚细胞定位表达载体.方法采用PCR方法和基因枪法.结果用PCR法,以pGEM- T- HcGKR质粒为模板,获得HcGKR基因的目的片段.然后将其克隆到亚细胞定位表达载体35S:GFP中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的35S - GFP - HcGKR融合表达载体,使目的基因能够和GFP融合同时表达.采用基因枪法将35S - GFP - HcGKR转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h后,经共聚焦显微镜观察确定发出绿色荧光的位置,对HcGKR基因进行亚细胞定位.结论构建的亚细胞定位表达载体可在植物细胞中表达,通过洋葱细胞中绿色荧光的位置确定目的基因定位在细胞膜上,为进一步盐穗木HcGKR基因的功能奠定了理论基础.