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于常江;祁成年;张云生;沈敏;杨华;杨永林
YU Chang-jiang;QI Cheng-nian;ZHANG Yun-sheng;SHEN Ming;YANG Hua;YANG Yong-lin
摘要: [目的]克隆绵羊真核翻译起始因子eIF3h,构建原核表达载体,并诱导外源蛋白表达,检测、鉴定带有His标签的目的蛋白.[方法]根据Genbank中绵羊eIF3h基因CDS序列设计引物,PCR特异扩增DNA片段,酶切、连接至pET28α(+)载体,将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株中诱导eIF3h蛋白表达.采用SDS-PAGE电泳分析目的蛋白表达情况,利用Western blot技术检测、鉴定目的蛋白.[结果]正确、完整的克隆到绵羊eIF3h基因CDS区序列,片段全长1 059 bp.将重组质粒转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)株后,在37℃,1 mmol/L浓度的IPTG诱导3.5 h后获得以包涵体形式存在的目的蛋白,分子量大小约为40 kD.[结论]获得了完整、正解的绵羊eIF3h基因CDS区序列片段,构建了该基因的原核表达载体,成功诱导了绵羊eIF3h基因外源表达的目的蛋白,为绵羊eIF3h基因的后续研究提供了科学数据.