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Xinjiang Agricultural Sciences

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Cloning and Prokaryotic Expression of Phosphoserine Transaminase (serC) Gene

ZHAO Zhong-run;BAO Hui-fang;WANG Ning;ZHOU Ya-fei;YANG Hui;WANG Wei   

  • Received:2010-12-25 Revised:2010-12-25 Online:2010-12-25 Published:2010-12-25

磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因的克隆与原核表达

赵忠润;包慧芳;王宁;周亚飞;杨慧;王炜   

  1. 石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832000;新疆农业科学院微生物应用研究所,乌鲁木齐,830091;新疆农业科微生物应用研究所,乌鲁木齐,830091





摘要： [目的]检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达.[方法]根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coliJM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中,构建重组表达载体并转化宿主菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析.[结果]通过PCR扩增得到约1 100 bp的DNA片段,经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99.27;的同源性;对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的命名为pEC7- C;重组表达载体转化宿主菌,SDS-PAGE分析可见约41 kD与理论大小一致的目标蛋白条带.[结论]重组表达载体转化后E.coli BL21中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高,证明 serC基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达,为进一步构建L-丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础.