新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备

新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备

潘伊微;贺艳艳;潘辉;贾山岭;李莲瑞

塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔,843300;塔里木大学动物科学学院新疆兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

收稿日期:2013-03-25 修回日期:2013-03-25 出版日期:2013-03-25 发布日期:2013-03-25

Prokaryotic Expression and Preparation of Polyclonal Antibody TNF-α from Karakul Sheep

PAN Yi-wei;HE Yan-yan;Pan hui;JIA Shan-ling;LI Lian-rui

Received:2013-03-25 Revised:2013-03-25 Published:2013-03-25 Online:2013-03-25

摘要/Abstract

摘要： [目的]克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析.[方法]采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达.用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.[结果]重组质粒在BI21 (DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在.用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Westem-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别.[结论]表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性.

潘伊微;贺艳艳;潘辉;贾山岭;李莲瑞. 新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备[J]. .

PAN Yi-wei;HE Yan-yan;Pan hui;JIA Shan-ling;LI Lian-rui. Prokaryotic Expression and Preparation of Polyclonal Antibody TNF-α from Karakul Sheep[J]. .