牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用

牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用

韩猛立;黄新;钟发刚;唐思静

新疆农垦科学院畜牧兽医研究所/新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子,832000;巴音郭楞职业技术学院,新疆库尔勒,841000

收稿日期:2014-02-25 修回日期:2014-02-25 出版日期:2014-02-25 发布日期:2014-02-25

Establishment and Application of SYBR Green Ⅰ RealI Real-Time Quantitative RT-PCR Assay Ffor Thethe Detection Of of Bovine Viral Diarrhea Virus

HAN Meng-li;HUANG Xin;ZHONG Fa-gang;TANG Si-jing

Received:2014-02-25 Revised:2014-02-25 Published:2014-02-25 Online:2014-02-25

摘要/Abstract

摘要： [目的]在建立一种快速定量的用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank公布的BVDV 5′端非编码区(5′ UTR)核苷酸序列,软件分析后设计特异性扩增引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.[结果]建立的方法只能检测到BVDV,而与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒及牛冠状病毒没有交叉反应,具有高度的特异性;在102～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.998,最低可检测下限可达到102 copies/μL,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数均小于1.5;,具有重复性好的特点.[结果]成功建立了一种用于检测BVDV的实时荧光定量RT-PCR技术,并可用于临床样品的检测,适用于BVDV的快速诊断和流行病学调查.

韩猛立;黄新;钟发刚;唐思静. 牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. .

HAN Meng-li;HUANG Xin;ZHONG Fa-gang;TANG Si-jing. Establishment and Application of SYBR Green Ⅰ RealI Real-Time Quantitative RT-PCR Assay Ffor Thethe Detection Of of Bovine Viral Diarrhea Virus[J]. .