中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立

中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立

田月珍;黄锡霞;狄江;田可川;吴伟伟;徐新明;哈尼克孜;付雪峰;张艳花;马依拉;艾买提

新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐830052;新疆畜牧科学院,乌鲁木齐830000;新疆农业大学动物科学学院,乌鲁木齐,830052;新疆畜牧科学院,乌鲁木齐,830000

收稿日期:2012-06-25 修回日期:2012-06-25 出版日期:2012-06-25 发布日期:2012-06-25

Development of Real-time PCR for GAPDH Gene in the Skin Tissues of Merino Sheep

TIAN Yue-zhen;HUANG Xi-xia;DI Jiang;TIAN Ke-chuan;WU Wei-wei;XU Xin-ming;Hanikezi;FU Xue-feng;ZHANG Yan-hua;Mayila;Aimaiti

Received:2012-06-25 Revised:2012-06-25 Online:2012-06-25 Published:2012-06-25

摘要/Abstract

摘要： [目的]建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础.[方法]采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real - Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析.[结果]以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.679 5lgX+ 35.648,相关系数R=0.999 8；试验重复性好,批内和批间变异系数(CV;)分别为0.22;～3.45;和1.30;～4.89;.[结论]所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究.

田月珍;黄锡霞;狄江;田可川;吴伟伟;徐新明;哈尼克孜;付雪峰;张艳花;马依拉;艾买提. 中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立[J]. .

TIAN Yue-zhen;HUANG Xi-xia;DI Jiang;TIAN Ke-chuan;WU Wei-wei;XU Xin-ming;Hanikezi;FU Xue-feng;ZHANG Yan-hua;Mayila;Aimaiti. Development of Real-time PCR for GAPDH Gene in the Skin Tissues of Merino Sheep[J]. .